Genomic DNA extraction using CTAB

  1. Centrifugue 1,5 mL de uma cultura overnight;
  2. Ressuspenda o pellet em 567 µl TE;
  3. Adicione 30 µl de 10% SDS e 3 µl de proteinase K (20 mg/mL) e incube por 1h a 37º C;
  4. Adicione 100 µl de 5 M NaCl e misture completamente;
  5. Adicione 80 µl de CTAB/NaCl1 e misture, incube por 10 min a 65ºC;
  6. Adicione igual volume de clorofórmio, misture e centrifugue por 5 min a 13000 RPMs;
  7. Transfira o sobrenadante para um novo tubo;
  8. Adicione igual volume de fenol:clorofórmio, misture e centrifugue por 5 min a 13000 RPMs;
  9. Transfira o sobrenadante para um novo tubo;
  10. Adicione 0,6 volumes de isopropanol e misture gentilmente até o DNA precipitar. Transfira o precipitado com uma pipeta Pasteur fechada para um tubo contendo 1 mL de etanol a 70%;
  11. Centrifugue por 5 min a 13000 RPMs e seque a amostra;
  12. Ressuspenda em água ou TE.

1CTAB/NaCl: 10% CTAB + 0,7 M NaCl