DNA digestion with Restriction Endonucleases

  1. Adicione em um microtubo:
    DNA1 1-20 \µl
    Enzima de restrição2 0.5-2.0 \µl
    10X Tampão específico 1-10 \µl
    ajustar para 10-100 \µl
  2. Incube por 2 h a temperatura recomendada
  3. Separe 1/10 do produto da reação em gel de agarose para verificar a eficiência da reação
  4. Inative a enzima aquecendo por 20 min a 65 ou 85 (de acordo com a enzima)
  5. Extraia com e precipite o DNA

 

11 unidade enzimática digere 1 \µg de DNA em 60 min em volume de 50 \µl

2Se for utilizar mais de uma enzima de restrição consulte a Tabela do fabricante